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UV紫外线灯在动物绿色荧光蛋白(GFP)观察中的应用

时间:2010-01-06 17:04来源:上海君达 作者:上海君达 点击:
  

 UV紫外线灯在动物绿色荧光蛋白(GFP)观察中的应用

紫外动物图像照相系统

上图为带紫外线灯的动物图像照相系统的外观
 


大的开关门方便观测物的拿进拿出

上图为通过此装置方便观测到右侧的动物里的绿色荧光蛋白

(空)

发现动物内脏器官里的绿色荧光蛋白

取出动物内脏器官里的绿色荧光蛋白照相

有关此紫外线灯的具体应用请咨询我公司的技术应用工程师,联系电话:021-64822921 64833361

备注:

GFP:绿色荧光蛋白

  GFP,即绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein )
 
  2001年1月11日,美国科学家宣布培育成世界上首只转基因猴, 这是世界上首次培育成功转基因灵长类动物. 添加在这只名为"安迪"的猴子体内的就是这种标志基因。
 
  1.GFP的发光特性
 
  GFP吸收的光谱,最大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光);发射光谱最大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder).
 
  GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,因此为荧光素FITC设计的荧光显微镜滤光片组合同样适用于GFP观察.
 
  尽管450~490nm(蓝光)是GFP的副吸收峰,但由于长波能量低,细胞忍受能力强,因此更适合于活体检测.
 
  2.GFP的性质
 
  GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强,特别在450~490nm蓝光波长下更稳定.
 
  GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复.而一些弱还原剂并不影响GFP荧光.中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定,脱水剂戊二酸或甲醛等.
 
  GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析.
 
  但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白.
 
  由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的.
 
  3.GFP的发现
  GFP是从一种生活在北太平洋寒冷水域的水母体内发现的。这种水母体内含有一种生物发光蛋白质——aequorin,它本身发蓝光。GFP能把这种光转变成绿色,也就是当水母容光焕发的时候我们实际看到的颜色。GFP的纯溶液在典型的室光下呈黄色,但是当被拿到户外的阳光下时,它会发出鲜绿的颜色。这种蛋白质从阳光中吸收紫外光,然后以能量较低的绿光形式发射出来。
 
  4.GFP的应用
  您可能要说:“谁会在乎水母体内的这种名不见经传的小小的绿色蛋白质呢?”GFP在科学研究上有着惊人的用途,因为它能够使我们直接看到细胞内部的运动。情况。在任何指定的时间我们都可以轻易地找出GFP在哪儿:你只需要用紫外光去照射,这时所有的GFP都将发出鲜艳的绿色。不妨做个实验:你把GFP连接到你有兴趣观察的任何对象上。比如,你可以把它连接到一种病毒上。然后,随着病毒在宿主体内不断扩散,你就可以通过跟踪发出的绿光来观察病毒的扩散途径;或者你把它接合到一种蛋白质上并通过显微镜观察它在细胞内部的移动(锐博生物提供GFP、EGFP质粒)。
 
  GFP是一种现成的荧光蛋白质,因此它特别容易使用。大多数可以处理光的蛋白质都利用外来的分子吸收和释放光子。例如,我们眼睛里的视紫红质利用维生素来感光。这些“发光团”必须是专门为了发光而生成的,并且被仔细地插入到该蛋白质分子内,不同的是,GFP控制光的部位是其自身的一部分,仅由氨基酸构建而成,该部位含有一段三个氨基酸组成的特殊序列:丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸(有时丝氨酸会被相似的苏氨酸取代)。当蛋白质链折叠时,这段短片段就被深埋在蛋白质内部,然后,发生一系列化学反应:甘氨酸与丝氨酸之间形成化学键,生成一个新的闭合环,随后这个环会自动脱水。最终,经过大约一个小时的反应,周围环境中的的氧气攻击酪氨酸的一个化学键,形成一个新的双键并合成荧光发色团。由于GFP可以形成自己的发色团,它非常适合于基因工程。你根本不必担心操作任何奇怪的发色团,你只需要利用遗传学的方法操纵细胞合成GFP蛋白质,GFP就会自动折叠并开始发光。
 
  5.GFP的结构
  在蛋白质编号lema中可以看到GFP发色团的骨架在左边。蛋白质链形成一个圆柱形罐头(蓝色),子链的一部分直接从中间穿过(绿色),发色团刚好在罐头盒的中间,它被保护起来以免受周围环境的影响。这种保护对于发射荧光是必需的。一但发色团吸收一个光子,激活的水分子通常就会夺取它的能量。但是在蛋白质内部改为发射能量稍低的光子来释放能量,使它得到了保护。发色团(如右图)由蛋白质链上的三个氨基酸:甘氨酸,酪氨酸和苏氨酸(或丝氨酸)自发形成。

 

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